尼帕病毒PCR檢測試劑盒說明書

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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
L-Phenylalanil小鼠腸平滑肌細胞*培養基2,5-二甲基-2,5-雙(過氧化叔丁基)-3-己炔 試劑級

D-Phenylalanil小鼠腸粘膜上皮細胞*培養基乙酸異戊酯 AR，99%

D-Phenylglycil小鼠腸動脈內皮細胞*培養基過氧化十二酰 98%

D-Prolil小鼠腸靜脈內皮細胞*培養基過硫酸鈉 99.99% metals basis

L-Methionionl小鼠肝實質細胞*培養基四苯鈉 AR,99%

L-Threonil小鼠肝動脈內皮細胞*培養基四苯鈉 99.5%

L-Valil小鼠肝動脈平滑肌細胞*培養基2,5-二甲基-2,5-雙-（叔丁基過氧）己烷 93%

L-Isoleucil小鼠小腸血管內皮細胞*培養基正丁 GR（）

D-Tryptophal小鼠小腸隱窩上皮細胞*培養基異丁 99%()

(R)-(−)-Leucil小鼠肝內膽管上皮細胞*培養基異丁 Standard for GC, ≥99.5% (GC)

Boc-L-asparagine小鼠胃粘膜上皮細胞*培養基聚烯酰胺 非離子型，分子量：200萬-1400萬

Boc-D-asparagine小鼠肝竇內皮細胞*培養基磷酸三苯酯 分析標準品,≥99.8%(GC)

Boc-Asp-OH小鼠肝星形細胞*培養基磷酸三苯酯 CP

Boc-D-Asp-OH小鼠直腸平滑肌細胞*培養基磷酸三苯酯 98%

Boc-L-glutamine小鼠小腸平滑肌細胞*培養基磷酸*酚酯 99%

Boc-D-glutamine小鼠結腸平滑肌細胞*培養基環胞霉素A 98%

氯替潑諾VEGFR-3(Vascular Epidemal growth factor receptor-3)  血管內皮細胞生長因子受體-3抗原STAT4  信號轉導和轉錄激活因子4抗體

氯替潑諾(標準品)VWF (Von Willebrand Factor)  血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗原STAT3  信號轉導和轉錄激活因子3抗體

洛伐他汀Wnt1  信號通路Wnt1抗原STAT2  信號轉導和轉錄激活因子2抗體

洛伐他汀(標準品)WWOX (WW domain-containing oxidoreductase)  包含氧化還原酶的WW域抗原STAT1  信號轉導與轉錄激活因子1抗體

盧比前列腺素/盧比前列酮XIAP(X-linked Inhibitor of Apoptosis Protein)  X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白抗原STARD8  GTP酶激活因子STARD8抗體

賴氨酸加壓素；賴氨加壓素XAF1(XIAP-associated factor 1)  XIAP相關因子1凋亡抑制蛋白抗原STARD5  促黃體激素誘導蛋白5抗體

醋酸M肽XRCC1(X-ray Repair Cross Complementing 1)  X射線修復交叉互補蛋白/細胞堿基切除修復基因抗原StAR/StARD1  促黃體激素誘導蛋白抗體

鹽酸甲氯芬酯ZO-1 peptide  胞質緊密粘連蛋白1抗原Staphyloccocus aureus Rosenbach tropina  金黃色葡萄球菌菌體蛋白抗體

鹽酸甲氯芬酯(標準品)Ag-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein)  ARC(多肽抗原)Stanniocalcin 1  斯鈣素抗體

安宮Angiotensin II receptor(Ang II )  血管緊張素Ⅱ受體(抗原)STAM  信號轉導銜接蛋白1抗體
尼帕病毒PCR檢測試劑盒說明書人抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃100毫克

人第八因子相關抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1克

人電子轉移黃素蛋白β肽(ETFB)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：10克

人淀粉樣前體蛋白(βAPP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1克

人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1克

人凋亡相關半胱氨酸肽酶4(Casp4)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5毫克

人凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃5克

人凋亡相關因子配體(FASL)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克