狂犬病病毒通用PCR檢測試劑盒說明書

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
Tin磷酸氫鈣，二 Ph. Eur., BP, USP, 98-102.5% 苯乙 95%

Tin羥基纖維素 2%粘度6mPa.s;甲氧基28-30%;羥基7.0-12%苯乙 95%

Tin羥基纖維素 2%粘度15mPa.s;甲氧基28-30%;羥基7.0-12%苯乙 ≥90%, FCC, Kosher, FG

Tin羥基纖維素 2%粘度50mPa.s;甲氧基28-30%;羥基7.0-12%苯乙 50%溶液

Tin(II) oxide羥基纖維素 2%粘度3mPa.s;甲氧基28-30%;羥基7.0-12%高氯酸 AR,99.5%

Tin(IV) oxide3-羧基環丁胺 98%高氯酸鈉，無  ACS, ≥98.0%

Tin(II) oxalate氮雜環丁烷鹽酸鹽 97%高氯酸鈉，無 99.99% metals basis

Tungsten1-二苯甲基-3-羥基氮雜環丁烷鹽酸鹽 96%高氯酸鈉，無 for HPLC,99.0%

Tungsten carbide二苯 97%高氯酸鈉，一 ACS, 98%

Tungsten(VI)oxide苯并呋喃酮 98%氯酸鈉 CP, ≥98.0%

Cerium(III) fluoride二苯烷 99%3-O-甲基-D-吡喃葡萄糖 99%

Cerium(IV) oxide2-羥基 99%過硫酸氫   ≥47% KHSO5 basis

Aluminum acetate basic3-羥基氮雜環丁烷鹽酸鹽 97%二甲氨酰氯 97%

Aluminum tristearate鄰羥基苯基苯酮 97%3-硝基-4-氨基苯酚  98%

Aluminum isopropoxide三苯烷 99%4-硝基鄰苯二胺 97%

Chromium三苯基氯 97%納米三氧化二鐵（α- Fe2O 30nm 球形，99.5%,α型

γ-氨基丁酸(GABA) ASC/TMS1 (E1E3I) Rabbit mAbPRRSV M protein  豬藍耳病病毒M蛋白抗體

γ-氨基丁酸(GABA),標準品Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb (PE Conjugate)PRR15  富含脯氨酸蛋白15抗體

澳洲茄邊堿（標準品）Cell Health Assay KitPRR11  富含脯氨酸蛋白11抗體

澳洲茄堿（標準品）IL-17A (D1X7L) Rabbit mAb (Mouse Specific)PRPH2  外周蛋白2抗體

安格洛苷 C（標準品）SimpleChIP® Human FDPS Promoter PrimersPRPF4  PRPF4蛋白抗體

托瑞米芬Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)prox1  prox-1抗體

托瑞米芬(標準品)p130 Cas (E1L9H) Rabbit mAbProtor-1  癌抑制基因Protor1抗體

來那替尼DNA Polymerase η (E1I7T) Rabbit mAbProtein Z  蛋白Z抗體

甲基原薯蕷皂苷(標準品)Phospho-ATF-2 (Thr71) (11G2) Rabbit mAb (PE Conjugate)Protein S/PROS  蛋白S抗體

纖細薯蕷皂苷(標準品)UNC5B (D9M7Z) Rabbit mAbProtein G  重組蛋白G抗體
狂犬病病毒通用PCR檢測試劑盒說明書人抑制素A(INH-A)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

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人幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1克